簡述大鼠肝微粒體的制備方法

　　肝臟是藥物的主要代謝器官，富含參與藥物的一相代謝和二相代謝的混合功能氧化酶系統，其中90%藥物主要是由細胞色素P450酶參與進行生物轉化。采用從肝臟或腸提取的微粒體，加入還原型輔酶Ⅱ（NADPH）再生系統，在體外模擬生理環境下進行代謝反應，采用高效液相色譜質譜聯用法等測定方法對原性藥及代謝產物進行測定，其中肝微粒體法較為常見。

 

　　大鼠肝微粒體是肝、腸、腎等器官經過差速離心制備的亞細胞成分，是細胞器內質網一部分，該部分表達有種類多樣的蛋白質。具有完整的I相代謝酶（如細胞色素P450、黃素單加氧酶、單胺氧化酶等），II相代謝酶（如葡萄糖醛酸轉移酶，硫酸基轉移酶）、酯酶等，能體現絕大部分人體內藥物代謝的情況，是FDA指導原則的預測人體內代謝及抑制試驗的研究工具。

 

　　下面小編要與大家分享的是大鼠肝微粒體的制備方法：

 

　　1、購買實驗動物SD大鼠，20只，雌雄各半，體重（180-220）g。

 

　　2、大鼠肝臟灌流，購買的大鼠當天腹腔注射3%（30mg?kg-1），使其麻醉，利用酒精進行常規消毒后，打開腹腔暴露肝臟，肝門靜脈處進行插管并固定。結扎上腔靜脈，剪破下腔靜脈用磷酸鹽緩沖液進行灌流，直至肝臟顏色呈土黃色。

 

　　3、灌流好的肝臟取出后按1：4比例放入裝有磷酸鹽緩沖液（含1mMEDTA,0.25M蔗糖）的勻漿管內，剪碎、勻漿。

 

　　4、將勻漿液倒入50mL高速離心管中在4℃條件下9000g離心20min。

 

　　5、保留上清并轉移到超速離心管中，在4℃條件下100000g離心60min。

 

　　6、保留沉淀并重新混懸于磷酸鹽緩沖液（含0.9%的NaCL）中,4℃條件下100000g再離心60min，得到的沉淀即為肝微粒體。

 

　　7、將其重懸于0.1M磷酸緩沖液（PH7.4，20%甘油，1mMEDTA，0.25M蔗糖）中于-70℃冰箱保存，其中留取一小管用于蛋白濃度測定。